När cellerna ser lossnade, lägg till 2 volymer förvärmt komplett tillväxtmedium för att inaktivera trypsin. Fördela försiktigt mediet genom att pipettera över cellskiktets yta flera gånger för att säkerställa återhämtning av >95 % av cellerna.
Hur stoppar jag trypsinaktivitet?
Trypsinnedbrytningen kan stoppas genom frysning eller genom att sänka reaktionens pH till under pH 4 genom att tillsätta myrsyra, ättiksyra eller trifluorättiksyra (trypsin kommer att återfå aktivitet när pH höjs över pH 4). Rötade prover kan förvaras vid -20°C.
Vad neutraliserar trypsin?
En buffert innehåller kalcium- och magnesiumjoner kommer också att bromsa trypsinaktiviteten. FBS är dock det effektivare sättet att hämma trypsinaktivitet.
Inaktiverar serum trypsin?
Serum inaktiverar kvarvarande trypsin från enzymatisk nedbrytning av njurarna och de proteolytiska enzymer som sedan syntetiseras av cellerna. Nyligen trypsiniserade celler kunde odlas till monolager i frånvaro av serum förutsatt att de tvättades upprepade gånger för att avlägsna resterande trypsin.
Hur mycket media krävs för att inaktivera trypsin?
Så länge du använder minst 1:1-förhållande av 5-10 % serum-innehållande medium med ditt trypsin bör det finnas mer än tillräcklig hämning, följt av centrifugering och medium utbyte med färskt medium.
