Lämnar klenow fosforylerade toppar?

Innehållsförteckning:

Lämnar klenow fosforylerade toppar?
Lämnar klenow fosforylerade toppar?
Anonim

För det första lämnar både EcoR1 och Xba1 5' överhäng när de smälter DNA (liksom Nde1). I båda fallen är 3'-änden försänkt, varför polyermase kan lägga till baser. För det andra kan alla polymeraser bara lägga till baser till en 3'-ände, så Klenow kommer att lägga till 4 baser till den tillbakadragna 3'-änden av båda platserna för att generera trubbiga ändar.

Lämnar restriktionsenzymer ett 5-fosfat?

Vektorer och inlägg som smälts av restriktionsenzymer innehåller de nödvändiga terminala modifieringarna (5'-fosfat och 3'-hydroxyl), medan fragment skapade av polymeraskedjereaktionen (PCR) kanske inte.

Kan trubbiga ändar ligeras?

Blunt-end ligering

Blunt end ligering involverar inte basparning av de utskjutande ändarna, så alla trubbiga ändar kan ligeras till en annan trubbig ände. Trubbiga ändar kan genereras av restriktionsenzymer som Smal och EcoRV.

Producerar Taq-polymeras trubbiga ändar?

Yes… Taq Polymerase lägger till A-Overhangs om du håller det sista förlängningssteget vid 72 dC på PCR. Används mest för TA-kloning.

Varför använda Klenow-fragment i DNA-sekvensering?

Klenow-fragmentet är extremt användbart för forskningsbaserade uppgifter som: Syntes av dubbelsträngat DNA från enkelsträngade mallar . Fyllning av tillbakadragna 3'-ändar av DNA-fragment för att göra 5' överhäng trubbigt . Smälta bort utskjutande 3' överhäng.

Rekommenderad: