Var finns primerdimerer?

Innehållsförteckning:

Var finns primerdimerer?
Var finns primerdimerer?
Anonim

Primer-dimerartefakter förekommer vanligtvis vid ett stort tröskelcykeltal (vanligtvis > 35 cykler), vilket är högre än tröskelcykelnumret för den önskade amplikonen. Primerdimerer ökar markant när heterologt genomiskt DNA tillsätts.

Var skulle du se primerdimerer på en DNA-gel?

I icke-kvantitativ slutpunkts-PCR kommer primerdimer att visas som ett mer eller mindre svagt utstryk på en agarosgel, under produktbandet av intresse.

Hur bildas primerdimerer?

Primerdimerer bildas när två primers binder till varandra, istället för till mall-DNA, på grund av regioner med primerkomplementaritet.

Hur upptäcker du primerdimerer?

Det enklaste sättet att kontrollera om det finns primer-dimerer är att jämföra dina reaktioner med din negativa kontroll (vatten istället för DNA eller RNA). Primerdimerer kommer fortfarande att bildas i den negativa kontrollen. Vissa primeruppsättningar är mer benägna att bilda dimerer än andra.

Varför visas primerdimerer?

De flesta primerdimerer ses på grund av hög koncentration av primern i PCR-reaktionsblandningen. Eller om det inte finns någon PCR-amplifiering och du kan se på primerdimer i agarosgelen. Om du kan se PCR-produkten kan du minska koncentrationen av primern och behålla de andra förhållandena oförändrade.

Rekommenderad: