Trypsinisering är processen för celldissociering med hjälp av trypsin, ett proteolytiskt enzym som bryter ner proteiner, för att dissociera vidhäftande celler från kärlet där de odlas. När det tillsätts till en cellkultur bryter trypsin ner proteinerna som gör att cellerna kan fästa vid kärlet.
Varför trypsiniserar vi celler?
Trypsinisering görs ofta för att tillåta passage av cellerna till en ny behållare, observation för experiment eller minskning av graden av sammanflytning i kolven genom att ta bort en procentandel av cellerna.
Hur fungerar trypsin för att lossa celler?
Trypsin/EDTA är en kombinerad metod för att ta loss celler. Trypsin skär adhesionsproteinerna i cell-cell- och cell-matrix-interaktioner genom att skära aminosyran i adhesionsproteinerna specifikt vid lysin eller aginin på C-terminalen om uppströms aminosyra inte är prolin.
Hur får man trypsiniserade vidhäftande celler?
Procedur
- Ta bort mediet från odlingskärlet genom aspiration och tvätta monoskiktet med en s altlösning fri från Ca2+ och Mg 2+ för att ta bort alla spår av serum. …
- Ta ut tillräckligt med trypsin eller trypsin/EDTA-lösning i odlingskärl för att helt täcka monoskiktet av celler och placera i 37 °C inkubator i ~2 minuter.
Hur inaktiverar jag trypsin i cellkultur?
När cellerna är fristående lägg till 2 volymerav förvärmt komplett odlingsmedium för att inaktivera trypsin. Fördela försiktigt mediet genom att pipettera över cellskiktets yta flera gånger för att säkerställa återhämtning av >95% av cellerna. För serumfria kulturer, sojaböntrypsinhämmare (produktnr
